实时定量PCR选择指南

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实时定量PCR选择指南

文章来源：文章作者：发布时间：2007-07-02 字体： [大中小]

实时定量PCR选择指南

DyNAmo™ qPCR Kits是实时定量PCR的最佳选择，适合定量检测不同来源的DNA和RNA样本。DyNAmo qPCR试剂盒家族包括适合SYBR Green方法和探针方法的优化试剂盒。所有的优化试剂盒都是2x master mixe形式，只需另外加入模板和引物即可。ROX™ 对照染料单独包装。所有的试剂盒都有dUTP，因此UNG酶处理可以降低交叉污染。

DyNAmo qPCR试剂盒选择表：

Chemistry	SYBR® Green		Probe
	DyNAmo™ SYBR® Green qPCR Kits		DyNAmo™ Probe qPCR Kits
模板	DNA		DNA
仪器	Block	Capillary	Block	Capillary
试剂盒	F-415Flash F-410 F-400R F-400	F-420	F-450	F-450

DyNAmo™ SYBR® Green qPCR Kits

DyNAmo SYBR Green qPCR Kits用于实时定量PCR，使用的检测染料是SYBR Green I。SYBR Green I可以与任何双链DNA结合并产生荧光，因此无需特异性探针，只需通过检测SYBR Green I染料插入PCR产物后的荧光变化来定量分析PCR产物。DyNAmo SYBR Green qPCR Kits采用的酶是改进的Thermus brockianus (Tbr) DNA聚合酶

DyNAmo™ Flash SYBR® Green qPCR Kit (F-415S/L)：目前市面上最快速的定量PCR试剂盒，约70分钟完成扩增。

DyNAmo™ HS SYBR® Green qPCR Kit (F-410S/L)：优化的热启动试剂盒，适合所有基于加热模块设计的实时定量PCR仪器。

DyNAmo SYBR Green qPCR Kit (F-400S/L)和DyNAmo™ SYBR® Green qPCR Kit with ROX™ passive reference dye (F-400RS/L)：适合所有基于加热模块设计的实时定量PCR仪器。

DyNAmo™ Capillary SYBR® Green qPCR Kit (F-420S/L)：优化的热启动试剂盒，适合所有毛细管实时定量PCR仪器。(e.g. LightCycler).

DyNAmo™ Probe qPCR Kit

DyNAmo Probe qPCR Kit（F-450S/L）是通过特异性探针来实现实时定量PCR检测的试剂盒，与任何序列特异性探针兼容，如TaqMan探针等。试剂盒使用的酶是热启动的Tbr DNA聚合酶，与任何定量PCR仪器兼容。

产品介绍：

产品

应用

DyNAmo™ HS SYBR® Green qPCR Kit是一种即用型的2x master mix，适合高特异性的定量PCR分析。含除模板DNA和PCR引物以外所有的qPCR用试剂（含ROX染料），其中使用的酶是热启动的Thermus brockianus DNA polymerase。

DyNAmo HS SYBR Green qPCR Kit与所有基于加热模块设计的定量PCR仪兼容。对于毛细管的定量PCR，需要选择配套的DyNAmo Capillary SYBR Green qPCR Kit。

优点：

特异性：降低了引物二聚体和引物的非特异性配对几率
灵敏度：反应体系优化，适合检测低拷贝的模板
宽的动力学范围：可检测单拷贝基因，检测范围达8个数量级
方便：2×反应Mix，无需添加酶或MgCl₂

扩增和融解曲线结果显示在宽的模板拷贝数范围内，都能获得很好的实验结果；即使对难扩增的模板都有很好的扩增效果。

Figures 1a-1b. DyNAmo HS SYBR Green qPCR Kit 扩增335 bp的lambda DNA，反应体积20 µl，模板拷贝数范围在5-50,000,000之间。仪器为DNA Engine Opticon® System (Bio-Rad Laboratories).

Figures 2a-2b. DyNAmo HS SYBR Green qPCR Kit 扩增481 bp的beta actin基因的扩增子，反应体积20 µl，使用模板量0.035 ng-200 ng不等，融解曲线显示试剂盒扩增特异性非常好，仪器为DNA Engine Opticon® System (Bio-Rad Laboratories).

试剂盒组分：

DyNAmo™ HS SYBR® Green qPCR Kit	F-410S	F-410L
2x Master Mix (含热启动Thermus brockianus DNA聚合酶、SYBR Green I染料、优化的PCR buffer, 5 mM MgCl₂, dNTP mix including dUTP)	1 x 1 ml (for 40 reactions of 50 µl volume or 100 reactions of 20 µl volume)	5 x 1 ml (for 200 reactions of 50 µl volume or 500 reactions of 20 µl volume)
50x ROX passive reference dye	1 x 50 µl	1 x 250 µl

DyNAmo™ SYBR® Green qPCR Kit为即用型2x master mix，适合高灵敏度的定量检测目标基因。含除模板DNA和PCR引物以外所有的qPCR用试剂（含ROX染料），其中使用的酶是Thermus brockianus DNA polymerase。

优点：

灵敏度：反应体系优化，适合检测低拷贝的模板
宽的动力学范围：可检测单拷贝基因，检测范围达8个数量级
方便：2×反应Mix，无需添加酶或MgCl₂

下表的扩增曲线显示，使用DyNAmo SYBR Green qPCR Kit可以检测低拷贝的模板，具有较早的Ct值。信号水平较高、反应时间缩短。

Figures 1a,2a. Finnzymes DyNAmo™ SYBR® Green qPCR Kit (1) 与目前市场上主流试剂供应商的qPCR kit实验对比结果：反应模板10倍稀释（1-1,000,000 copies）后扩增的循环数和荧光强度的对比分析显示。

Figures 1b,2b. 标准曲线分析：可以用于分析样本中目标基因的拷贝数

试剂盒组分：

DyNAmo™ SYBR® Green qPCR Kit	F-400S	F-400L
2x Master Mix (含Thermus brockianus DNA聚合酶, SYBR Green I 染料, 优化的PCR buffer, 5 mM MgCl₂, dNTP mix including dUTP)	1 x 1 ml (for 40 reactions of 50 µl volume or 100 reactions of 20 µl volume)	5 x 1 ml (for 200 reactions of 50 µl volume or 500 reactions of 20 µl volume)

DyNAmo™ SYBR® Green qPCR Kit with ROX™ passive reference dye	F-400RS	F-400RL
2x Master Mix (含Thermus brockianus DNA聚合酶, SYBR Green I 染料, 优化的PCR buffer, 5 mM MgCl₂, dNTP mix including dUTP)	1 x 1 ml (for 40 reactions of 50 µl volume or 100 reactions of 20 µl volume)	5 x 1 ml (for 200 reactions of 50 µl volume or 500 reactions of 20 µl volume)
50x ROX™ passive reference dye	1 x 50 µl	1 x 250 µl

DyNAmo™ Capillary SYBR®

Green qPCR Kit

(F-420S/L)

DyNAmo™ Capillary SYBR® Green qPCR Kit是针对毛细管的定量PCR仪(e.g. LightCycler™)开发的试剂盒，是即用型的2x master mix，适合高特异性的定量PCR分析。含除模板DNA和PCR引物以外所有的qPCR用试剂（含ROX染料），其中使用的酶是热启动的Thermus brockianus DNA polymerase。

优点：

特异性：降低了引物二聚体和引物的非特异性配对几率
灵敏度：反应体系优化，适合检测低拷贝的模板
扩增效率高：优化的反应条件和改进的DNA聚合酶，可提高检测灵敏度
方便：2×反应Mix，无需添加酶或MgCl₂

使用DyNAmo Capillary SYBR Green qPCR Kit可以高效扩增困难模板，少到3个拷贝数都可以检测出来。融解曲线显示没有非特异性扩增出现。

Figures 1. DyNAmo Capillary SYBR Green qPCR Kit扩增481 bp长度的beta actin基因的扩增子，模板的起始拷贝数范围是3-1 x 10⁵。使用LightCycler™ System (Roche). 反应条件如下：

Initial denaturation:	95 °C 15 min
45 cycles of:	95 °C 15s 62 °C 20s 72 °C 30s

试剂盒组分：

DyNAmo™ Capillary SYBR® Green qPCRKit	F-420S	F-420L
2x master mix (含热启动的Thermus brockianus DNA聚合酶、SYBR Green I染料, 优化的PCR buffer, 6 mM* MgCl₂ and dNTP mix including dUTP)	2 x 500 µl (for 100 reactions in 20 µl volume)	10 x 500 µl (for 500 reactions in 20 µl volume)

DyNAmo™ Probe qPCR Kit

(F-450S/L)

DyNAmo™ Probe qPCR Kit是即用型的2x master mix，用于高特异性的定量PCR分析。试剂盒含有所有qPCR用的组分（采用热启动Thermus brockianus DNA聚合酶），客户只需加入模板DNA、PCR引物和探针即可。与任何定量PCR仪器兼容。

优点：

宽的动力学范围：高达8个数量级
灵敏度和特异性：优化的qPCR试剂

宽的动力学范围和灵敏度：

DyNAmo™ Probe qPCR master mix扩增插入质粒载体中的人乳头瘤病毒基因（76bp），起始模板的浓度范围10⁸ -10 copies。检测探针为HEX-BHQ labeled TaqMan® probe。仪器为ABI 7500 Real Time PCR System (Applera Corporation, Inc.). 标准曲线的斜率是-3.363，相关系数R² 为0.9997。

试剂盒组分：

DyNAmo™ Probe qPCR Kit	F-450S	F-450L
2x Master Mix (含热启动Thermus brockianus DNA聚合酶、优化的PCR buffer, MgCl₂, dNTP mix including dUTP)	1 x 1 ml (for 40 reactions of 50 µl volume or 100 reactions of 20 µl volume)	5 x 1 ml (for 200 reactions of 50 µl volume or 500 reactions of 20 µl volume)
50x ROX™ passive reference dye	1 x 50 µl	1 x 250 µl

产品列表：

目录号	产品说明	规格	价格	供应商
F-400L	DyNAmo SYBR Green qPCR Kit	200 rxn	3220	Finnzymes
F-400RL	DyNAmo SYBR Green qPCR Kit with ROX	200 rxn	3300	Finnzymes
F-400RS	DyNAmo SYBR Green qPCR Kit with ROX	40 rxn	900	Finnzymes
F-400S	DyNAmo SYBR Green qPCR Kit	40 rxn	860	Finnzymes
F-410L	DyNAmo HS SYBR Green qPCR Kit (with ROX)	200 rxn	3400	Finnzymes
F-410S	DyNAmo HS SYBR Green qPCR Kit (with ROX)	40 rxn	900	Finnzymes
F-420L	DyNAmo Capillary SYBR Green qPCR kit	500 rxn	6600	Finnzymes
F-420L-10	DyNAmo Capillary SYBR Green qPCR kit	5000 rxn	60000	Finnzymes
F-420S	DyNAmo Capillary SYBR Green qPCR kit	100 rxn	1800	Finnzymes
F-450L	DyNAmo Probe qPCR Kit	200 rxn	3600	Finnzymes
F-450L-10	DyNAmo Probe qPCR Kit	2000 rxn	33000	Finnzymes
F-450S	DyNAmo Probe qPCR Kit	40 rxn	900	Finnzymes

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