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蛋白功能研究新趋势：体外表达产品(上)
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日期：2007-02-26 09:55:25
点击：135 评论：0
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| 生物通在前面介绍了体外表达的概况，那么，如果打算进行体外表达实验，具体有哪些产品可供选择，费用如何呢？我们在这里为您介绍一些主流产品和各自的特点。 Ecoli体外表达体系 我们在前面的文章中提到，由于体外表达的翻译后加工都存在一定的困难（我们会在后面介绍Pro |
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蛋白质的双向电泳实验方法
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日期：2007-02-26 01:32:17
点击：103 评论：0
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| 第一向（等电点聚焦， IEF ） 1 ）凝胶条的准备 1． 以帽凝胶端（ 2 个校准环： 4mm 和 10mm ）朝下，将 4 根玻璃管插入两个凝胶灌注装置的每个托架中，这样玻璃管恰好站在两个分隔室之一的“充填船”上。从玻璃管顶端到玻璃管底端拉入 PP 线（小心，线不易移动），否 |
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双向电泳完整操作步骤
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日期：2007-02-25 12:41:50
点击：173 评论：0
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| 1. 从冰箱中取-20℃冷冻保存的水化上样缓冲液（I）（不含DTT，不含Bio-Lyte）一小管（1ml/管），置室温溶解。 2. 在小管中加入0.01g DTT， Bio-Lyte 4-6、5-7各2.5ml，充分混匀。 3. 从小管中取出400ml水化上样缓冲液，加入100ml样品，充分混匀。 4. 从冰箱中取-20℃冷 |
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蛋白复性（二）-基因重组蛋白质的体外复性
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日期：2007-02-16 11:33:47
点击：140 评论：0
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| 摘要 基因重组蛋白在大肠杆菌中表达时，由于表达量高，往往形成无生物活性的包涵体。包涵体必须经过变性和复性的过程才能获得有活性的重组蛋白。如何提高基因重组蛋白质的复性率，是生物工程技术的一个研究热点。对近年来的重组蛋白质的复性方法做一评述，为研究蛋白质 |
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蛋白质纯化经验指南（1）
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日期：2007-02-15 10:26:23
点击：155 评论：0
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| 1) 我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了 GST 亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。 请问有哪些可能会出现这种原因？怎么解决？测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助溶剂提取后，可以用 GST 做亲和层析， |
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蛋白质鉴定技术大比拼
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日期：2007-02-12 21:35:11
点击：101 评论：0
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| 目前，在蛋白质研究中，传统的工具仍然是研究中的主要力量，像Western blot、ELISA、IHC；但是新设备和新方法也不断涌现，都是为了用更小的样本，更快的获得重现性好的数据。本文将对Cell Biosciences、Roche、Eksigent Technologies、Invitrogen、Bio-Rad、Agilent、B |
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蛋白质结构预测--蛋白质结构预测
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日期：2007-01-31 12:18:04
点击：140 评论：0
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| 寻找某种蛋白质的空间结构，首先应该查询蛋白质数据库 HPDB 或 PDB ，即查询是否已经有人做过该蛋白质的空间结构测定。 HPDB 或 PDB 中只存储至今人们已知其空间结构的蛋白质，数量占生物体中存在的各种蛋白质的很小部分。由于资金和技术等方面的问题，人们尚不知道许 |
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蛋白质的双向电泳实验方法
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日期：2007-01-29 09:52:29
点击：69 评论：0
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| 第一向（等电点聚焦， IEF ） 1 ）凝胶条的准备 1． 以帽凝胶端（ 2 个校准环： 4mm 和 10mm ）朝下，将 4 根玻璃管插入两个凝胶灌注装置的每个托架中，这样玻璃管恰好站在两个分隔室之一的“充填船”上。从玻璃管顶端到玻璃管底端拉入 PP 线（小心，线不易移动），否 |
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蛋白质提取与纯化技术
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日期：2007-01-29 09:24:56
点击：98 评论：0
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| 选择材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物 |
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重组蛋白纯化方法---色谱分离
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日期：2007-01-29 09:17:47
点击：149 评论：0
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| 在现代生化制备技术中，色谱分离占有核心地位，可用于分离各种初级代谢产物如氨基酸、核苷酸、单糖类、有机酸、脂肪酸；次级代谢产物如生物碱、萜类、精油、糖苷、色素；各种生物大分子如蛋白质、多肽、酶、核酸、多糖。色谱方法根据分离机制的不同可分为吸附色谱、分配 |
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重组蛋白纯化方法---沉淀
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日期：2007-01-29 09:13:37
点击：189 评论：0
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| 在生化制备中，沉淀主要用于浓缩目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂： 1．盐析法 多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。 2．有机溶剂沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白质 |
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重组蛋白纯化方法---提取
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日期：2007-01-29 09:12:19
点击：198 评论：0
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| 狭义来讲，提取指制备物与细胞固体成分或其它结合成分的分离，由固相转入液相或从细胞内生理状态转入外界特定溶液环境的过程，即分离前期被提取物从破碎的细胞中释放出来的过程。如果被提取物程固相或与固体结合，提取时由固相转入液相，常称为固液萃取；如果被提取物已 |
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重组蛋白纯化方法---细胞破碎
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日期：2007-01-29 03:59:53
点击：112 评论：0
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| 组织细胞的破碎方法很多，有机械方法、物理方法、化学方法和生物化学方法等。在破碎前，材料常需要预处理，如动物材料要除去与实验无关甚至有妨碍的结缔组织，脂肪组织和血污等，植物种子需要除壳，微生物材料需将菌体和发酵液成分分开等。 不同实验规模、不同实验材料 |
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蛋白质含量测定法
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日期：2007-01-25 03:36:27
点击：159 评论：0
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| 本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。了解各种测定方法的基本原理和优缺点。 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。 |
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蛋白质沉淀法
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日期：2007-01-25 03:34:01
点击：231 评论：0
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| 在生化制备中，沉淀主要用于浓缩目的，或用于除去留在液相或沉淀在固相中的非必要成分。在生化制备中常用的有以下几种沉淀方法和沉淀剂： 1．盐析法 多用于各种蛋白质和酶的分离纯化。 2．有机溶剂沉淀法 多用于生物小分子、多糖及核酸产品的分离纯化，有时也用于蛋白 |
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