书接前言，蛋白分离纯化后首先要做的就是目的蛋白含量的测定及纯度的鉴定。

 

蛋白含量测定的方法：

1. 凯氏定氮法   经典的标准方法，但现在已不多用。

2. 双缩脲法       与硫酸铜－氢氧化钠溶液发生颜色反应。

3. Lowry法（Folin－酚试剂法）   多年来的蛋白标准测定方法，近年来得到改进，即下面的BCA法。

4. BCA法      4，4’－二羧－2，2’－二喹啉（bicinchoninic，BCA）与Cu⁺反应生成紫色复合物。

5. 紫外吸收法      280nm波长  精确度不高，但操作简便，样品可回收。

6. Bradford法（考马斯亮蓝结合法 ）    灵敏度高，能检测一个微克的蛋白，重复性好。

7. 胶体金测定法灵敏度最高，可达纳克水平。胶体金是一种带负电的疏水胶体，洋红色，遇蛋白变蓝。

8. 特殊蛋白特殊方法

 

蛋白纯度鉴定的方法：

通常采用物理化学的方法

a. 电泳      包括 等电聚集、 聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS－PAGE、 毛细管电泳

b. 沉降      纯蛋白在离心场中以单一的速度移动。

c. HPLC    常用于多肽、蛋白纯度鉴定。纯的样品在HPLC的洗脱谱上呈现出单一的对称峰。

d. 溶解度分析  恒浓度法（原理：纯蛋白在一定溶剂系统中具有恒定的溶解度，而不依赖于存在于溶液中未溶解固体的数量，在严格条件下，以加入的固体蛋白对溶解的蛋白做图，将只呈现一个折点，折点以前斜率为1，折点之后斜率为0，不纯的蛋白往往呈现2个或更多的折点。）

e. N端分析   纯的蛋白N端残基只能是一种氨基酸。

 

需要指出：采用任何单独一种方法鉴定所得结果只能作为蛋白均一性的必要条件而不是充分条件。事实上只有很少几个蛋白能够全部满足上面的严格要求，往往是在一种鉴定中表现为均一的蛋白，在另一种鉴定中又表现出不均一性。