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[核酸技术]
比较详细的PCR介绍
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日期：2007-01-26 10:19:35
点击：139 评论：0
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| 1.PCR反应的最适条件 4．1 TaqDNA聚合酶 在早期进行的PCR反应中，使用的是大肠杆菌DNA聚合酶1的大片段，，即Klenow片段。也曾有人用噬菌体T4 DNA聚合酶。这两种酶的共同弱点是对热不稳定性，DNA合成反应只能在370C进行。PCR时每一循环的解链温度都在90C以上进行，故在 |
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[核酸技术]
聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆
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日期：2007-01-26 10:17:34
点击：95 评论：0
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| 概 述 PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;(3) 延伸(Ext |
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[核酸技术]
浅谈PCR方法中常见的污染问题及对策
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日期：2007-01-26 10:11:45
点击：83 评论：0
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| 浅谈RT-PCR实验方法中常见污染问题及对策河南出入境检验检疫局技术中心 李轲反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目 |
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[核酸技术]
RT-PCR经验浅谈
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日期：2007-01-26 09:59:11
点击：99 评论：0
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| 做RNA病毒基因的RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备。本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增，设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等，分别进行RT-PCR扩增，刚开始的三个月，我们课题组三个人辛辛苦苦，什么招都想过了，结果连一个片段都没有 |
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[核酸技术]
RT-PCR实验方法总结大全
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日期：2007-01-26 09:54:52
点击：170 评论：0
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| RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求： 1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。 2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退 |
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[核酸技术]
减少PCR产物中引物二聚体的方法
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日期：2007-01-26 09:44:20
点击：95 评论：0
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| 减少引物二聚体的方法 1. 从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法； 2. 可能模板有问题； 3. 模板浓度过小，适当加大模板量； 4. Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度； 5. 取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5 |
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[核酸技术]
定量PCR技术
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日期：2007-01-26 09:12:57
点击：94 评论：0
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| 定量PCR（Polymerase Chain Reaction）技术有广义概念和狭义概念。广义概念的定量PCR技术是指以外参或内参为标准，通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测，进行PCR起始模板量的定量。 广义概念下的定量PCR技术可以分为五种类型： （1）外参法+终产物分析。所谓“外 |
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[核酸技术]
PCR经验总结
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日期：2007-01-25 12:53:39
点击：182 评论：0
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| ( 首先声明，此文不如分子克隆第三版权威与分子克隆相背处，请信分子克隆 ) 增加 PCR 的特异性 1. primers design 这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些条件 a 足够长 ,18-24bp, 以保证特异性 . 当然不是说越 |
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[核酸技术]
PCR引物设计的11条黄金法则
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日期：2007-01-25 12:15:22
点击：233 评论：0
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| 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度（pri |
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[核酸技术]
PCR引物设计及软件使用技巧
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日期：2007-01-25 12:10:16
点击：818 评论：0
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| PCR引物设计及软件使用技巧 张新宇，朱有康，高燕宁 （中国协和医科大学中国医学科学院肿瘤研究所，北京100021） 摘要：本文旨在介绍使用软件设计PCR引物的技巧。在PCR引物设计原则的基础上，详细介绍了两种常用引物设计软件的基本使用方法，并对其各自的优缺点进行了 |
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[核酸技术]
专家指南：实时定量PCR关键要素
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日期：2007-01-18 04:50:23
点击：132 评论：0
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| 实时定量PCR技术在科学应用上被誉为一门艺术。实时荧光定量PCR技术一直没有真正的实验标准，不同实验平台上得到的结果之间可能完全没有可比性。前段时间 生物通 推出的生物技术专题“定量PCR技术报告”系列文章受到了读者的关注。在此基础上， 生物通 收集编译世界各地 |
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[核酸技术]
专家指南：实时定量PCR关键要素(2)
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日期：2007-01-18 04:49:12
点击：144 评论：0
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| 实时定量PCR技术要领之二：你选择哪种有效的预扩增方法？ Tim Hunter，佛蒙特州大学（University of Vermont）癌症中心： 目前，对于低丰度目标样品或者低回收率的核酸，我们不需要使用预扩增（pre-amplification）步骤来产生足够的起始材料。我们在逆转录反应中设计的 |
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[核酸技术]
专家指南：实时定量PCR关键要素(3)
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日期：2007-01-18 04:47:08
点击：181 评论：0
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| 实时定量PCR操作要点之四：选择做定量PCR时，需要注意哪些因素？ Cristina Hartshorn，美Brandeis大学生物学： 我想细心的引物设计对于得到专一高效的模板扩增反应来说是十分必要的。研究人员可以利用新出的改进型软件程序来达到这个目的。我们实验室专注于高质量 PCR |
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[核酸技术]
PCR技术（一）：PCR技术概论
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日期：2007-01-16 14:57:39
点击：73 评论：0
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| PCR技术概论 PCR技术简史 PCR技术的基本原理 PCR反应体系与反应条件 PCR反应特点 PCR扩增产物的分析 聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点 |
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[核酸技术]
PCR技术（二）：PCR反应模板的制备
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日期：2007-01-16 14:55:58
点击：71 评论：0
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| PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量.模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂 |
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