|
 |
[核酸技术]
SOE法SDL法-PCR片段拼接
|
| |
日期：2007-02-07 10:08:39
点击：100 评论：0
|
| PCR技术（多聚酶链式反应）是现代分子生物学的一个巨大突破，它能在体外迅速、 大量、灵敏地扩增基因片段。可是，经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效 拼接，却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位点，这不但操 作繁杂，而有时为了构建限性 |
|
|
[核酸技术]
反向PCR方法程序
|
| |
日期：2007-02-06 13:03:15
点击：105 评论：0
|
| 描述一种大聚合酶链反应(PCR)应用的方法，使在已知序列的核心区边侧的未知 DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA，以产生适合于PCR扩 增大小的片段，然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同源于环上核心区 的末端序列，但其方向性，使链的延 |
|
|
[核酸技术]
大片段DNA的PCR扩增
|
| |
日期：2007-02-06 12:57:19
点击：115 评论：0
|
| 一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性： 通常所用的PCR方法都在两个方面有局限，即目标产物精确程度和合成片段的大� fu(Pyrococcus furiosus)DNA聚合酶，具有完整的3'外切酶校读活性（3'-editing-exonuclease），可以将每个循环中碱基的错配率由10*-4降到10*-3，从而 |
|
|
[核酸技术]
PCR产物电泳结果分析
|
| |
日期：2007-02-06 12:49:36
点击：264 评论：0
|
| PCR产物电泳 产物检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板 |
|
|
[核酸技术]
PCR简史原理反应特点
|
| |
日期：2007-02-05 13:09:10
点击：133 评论：0
|
| PCR技术简史 PCR技术的基本原理 PCR反应体系与反应条件 PCR反应特点 PCR扩增产物的分析 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管 |
|
|
[核酸技术]
琼脂糖|聚丙烯酰胺|凝胶电泳|PCR产物分析
|
| |
日期：2007-02-05 13:08:12
点击：375 评论：0
|
| 凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种. 一、琼脂糖凝胶电泳: 琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和 鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物.根据琼脂糖的溶解温度， 把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖.低熔点琼脂糖熔点 |
|
|
[核酸技术]
DNA聚合酶-Taq酶
|
| |
日期：2007-02-05 13:06:09
点击：108 评论：0
|
| Taq酶 - DNA聚合酶 是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌，能在70～75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的。 (一)DNA聚合酶活性与热稳定性 该酶基因全长2496个碱基，编码832个氨基酸，酶蛋白分子为 94KDa. |
|
|
[核酸技术]
实时PCR/RT-PCR解决方案---RT-PCR是什么
|
| |
日期：2007-01-31 10:31:37
点击：167 评论：0
|
| 实时PCR/RT-PCR解决方案 高性能的实时定量PCR和RT-PCR要求高性能的系统。易于使用的qPCR 超级混合物、一步和两步定量RT-PCR系统、以及荧光检测平台，在一个较宽的动态范围内提供更高的灵敏度和特异性，它们利用了最先进的技术，包括： 使用抗体介导热启动技术的Platinu |
|
|
[核酸技术]
PCR技术（一）：PCR技术概论
|
| |
日期：2007-01-29 09:23:27
点击：74 评论：0
|
| PCR技术概论 PCR技术简史 PCR技术的基本原理 PCR反应体系与反应条件 PCR反应特点 PCR扩增产物的分析 聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点 |
|
|
[核酸技术]
PCR技术（二）：PCR反应模板的制备
|
| |
日期：2007-01-29 09:22:11
点击：73 评论：0
|
| PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量.模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂 |
|
|
[核酸技术]
实时荧光定量PCR
|
| |
日期：2007-01-28 11:16:33
点击：120 评论：0
|
| 实时荧光定量PCR —— 一种科学准确的定量方法 实时荧光定量 PCR 技术于 1996 年由美国 Applied Biosystems 公司推出，由于该技术不仅实现了 PCR 从定性到定量的飞跃，而且与常规 PCR 相比，它具有特异性更强、有效解决 PCR 污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到 |
|
|
[核酸技术]
PCR需要注意的一些问题
|
| |
日期：2007-01-26 10:51:45
点击：117 评论：0
|
| 扩增长目的片段 当扩增大于5kb的目的片段时，可以使用用于超长PCR的酶或酶混合物以获得最佳产量）。 Taq DNA聚合酶并不能有效扩增较长目的片段（大于5kb），可能是因为其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能纠正dNTP错误掺入。错误配对的延伸几率大大降低，减少了较长产物的 |
|
|
[核酸技术]
PCR技术概论
|
| |
日期：2007-01-26 10:31:53
点击：117 评论：0
|
| 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究 的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观察和 |
|
|
[核酸技术]
PCR常见问题分析与对策
|
| |
日期：2007-01-26 10:29:10
点击：139 评论：0
|
| 1.PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 2.假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模 |
|
|
[核酸技术]
PCR实用技巧
|
| |
日期：2007-01-26 10:25:55
点击：157 评论：0
|
| 增加PCR的特异性： 1. primers design 这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些条件 a. 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的primer同样会降低特异性,并且降低产量 b. GC% 40%~60% c. 5'端 |
|
|
 |
|
本月热点文章 |
|
|
| |
|
|
本月推荐文章 |
|
|
| |
|
|
相关分类 |
|
|
|
|
|
