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[核酸技术]
PCR技术在遗传病诊断中的应用
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日期：2007-02-09 09:42:48
点击：126 评论：0
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| 自从1985年PCR技术首次应用于遗传病基因诊断以来，已有近百种遗传病可用PCR 技术进行诊断和产前诊断，利用PCR技术诊断遗传病的途径有五个，①基因突变位点 的直接检出②筛查与遗传病③④有关的点突变③遗传多态性标记连锁分析间接诊断④ 利用cmRNA逆转录为cDNA进行分析 |
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[核酸技术]
分子生物学试验方法探讨四－PCR常见问题
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日期：2007-02-09 09:31:30
点击：88 评论：0
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| PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：① |
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[核酸技术]
PCR定量技术--PCR ELISA
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日期：2007-02-09 09:29:56
点击：115 评论：0
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| PCR自诞生以来，人们就在努力探索PCR定量的方法。荧光素染色凝胶电泳在PCR最初的一段时间是唯一的检测技术，因此人们在凝胶电泳的基础上使用扫描照片进行光密度分析，以求实现PCR的相对定量。 但是由于普通凝胶电泳检测本身的不特异性，只能进行粗略的相对定量，难以满 |
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[核酸技术]
在检验医学领域要正确认识和使用PCR
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日期：2007-02-09 09:28:06
点击：63 评论：0
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| PCR对分子生物学，甚至在整个生命科学领域有极其重要的，划时代的推动作用。关于价值和意义是无庸置疑的。1989年DNA聚合酶被《Science》杂志评为年度风云分子，PCR被列为年度最重要发明，1993年并因此获得诺贝尔奖。 PCR的地位如此高，不仅仅在于他的高灵敏度，更重要的 |
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[核酸技术]
临床基因扩增检验实验室管理暂行办法
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日期：2007-02-09 09:26:39
点击：121 评论：0
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| 第一章 总 则 第一条 为规范临床基因扩增检验实验室管理，保证临床基因扩增检验质量，使临床诊断和治疗更为科学、合理，特制定本办法。 第二条 临床基因扩增检验技术指以临床诊断治疗为目的，以扩增检测DNA或RNA为方法的检测技术，如聚合酶链反应（PCR）、连接酶链反应 |
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[核酸技术]
临床基因扩增检验实验室工作规范
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日期：2007-02-09 09:22:46
点击：134 评论：0
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| 为使基因扩增检验技术有效地应用于临床，更好地为疾病的预防、诊断和治疗服务，保证检验质量，特制定本规范。 一、临床基因扩增检验实验室的规范化设置及其管理 临床基因扩增检验实验室的规范化设置详见《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002]10号文)附件 |
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[核酸技术]
荧光定量PCR技术的原理和应用进展
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日期：2007-02-09 09:21:30
点击：214 评论：0
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| 实时荧光定量PCR技术 (Real-Time Quantitative PCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在实时荧光定量PCR技术的发展过程中，两个重要的发现推动了荧光定量技术的大力发展：在90年 |
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[核酸技术]
PCR/RT-PCR指南---PCR和RT-PCR基础(1)
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日期：2007-02-09 09:20:41
点击：132 评论：0
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| PCR基础 聚合酶链式反应（PCR）过程利用模板变性，引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程，因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板，使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般，经过20-30个循环得到的扩增产物就足够在溴化乙锭染 |
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[核酸技术]
PCR/RT-PCR指南---增加RT-PCR灵敏度(2)
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日期：2007-02-09 09:18:25
点击：95 评论：0
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| 分离高质量RNA 成功的cDNA合成来自高质量的RNA。高质量的RNA至少应保证全长并且不含逆转录酶的抑制剂，如EDTA或SDS。RNA的质量决定了你能够转录到cDNA上的序列信息量的最大值。一般的RNA纯化方法是使用异硫氰酸胍／酸性酚的一步法。Trizol试剂法（见 下图 ）将一步法加 |
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[核酸技术]
PCR/RT-PCR指南---增加RT-PCR特异性(3)
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日期：2007-02-09 09:17:05
点击：93 评论：0
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| 起始cDNA合成 第一链cDNA合成的起始可以使用三种不同的方法，各种方法的相对特异性影响了所合成cDNA的量和种类。 随机引物法是三种方法中特异性最低的。引物在整个转录本的多个位点退火，产生短的，部分长度的cDNA。这种方法经常用于获取5'末端序列及从带有二级结构区 |
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[核酸技术]
PCR/RT-PCR指南---RT-PCR应用(4)
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日期：2007-02-09 08:59:48
点击：144 评论：0
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| 5' 和3' RACE RACE（cDNA末端快速扩增，Rapid Ampliphication of cDNA Ends）是一种获得转录本5'或3'未知序列的方法。不象普通RT-PCR那样使用两个序列特异性的引物，RACE使用一个序列特异性的引物和或者mRNA的poly(A)尾（3' RACE）或者加到cDNA末端的多聚同聚体（5' RA |
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[核酸技术]
PCR/RT-PCR指南---增加PCR特异性(5)
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日期：2007-02-09 08:56:46
点击：94 评论：0
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| 引物设计 细心地进行引物设计是PCR中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点： * 典型的引物18到24个核苷长。引物需要 |
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[核酸技术]
PCR/RT-PCR指南---增加PCR灵敏度(6)
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日期：2007-02-09 08:54:21
点击：76 评论：0
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| 模板质量 模板的质量会影响产量。DNA样品中发现有多种污染物会抑制PCR。一些在标准基因组DNA制备中使用的试剂，如SDS，在浓度低至0.01％时就会抑制扩增反应。分离基因组DNA较新的方法包括了DNAZol，一种胍去垢剂裂解液，以及FTA Gene Guard System，其可以同基质结合， |
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[核酸技术]
PCR/RT-PCR指南---提高忠实性(7)
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日期：2007-02-09 08:51:23
点击：88 评论：0
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| 带有校正功能的酶 包括克隆和效率分析，PCR产物表达或定点突变在内的PCR应用都需要高忠实性的PCR。Taq DNA聚合酶被看做是低忠实性的聚合酶，因为其缺少3'到5'外切核酸酶（校正）活性。使用带有3'到5'外切核酸酶活性的热稳定聚合酶可以提高忠实性。但是这些聚合酶的产量 |
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[核酸技术]
PCR/RT-PCR指南---其他需要考虑的事情(8)
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日期：2007-02-09 08:49:15
点击：95 评论：0
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| 扩增长目的片段 当扩增大于5kb的目的片段时，可以使用用于超长PCR的酶或酶混合物以获得最佳产量（参见 第十三章 ，PCR聚合酶的比较和 图24 ）。Taq DNA聚合酶并不能有效扩增较长目的片段（大于5kb），可能是因为其缺少3'-5'外切核酸酶活性，不能纠正dNTP错误掺入。错误 |
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