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[核酸技术]
PCR-SSCP的发展现状
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日期：2007-03-29 08:42:07
点击：81 评论：0
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| 随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现 .尤其是PCR技术问 世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称 PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性 片段长度多态性分析(Restric |
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[核酸技术]
SSCP注意事项
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日期：2007-03-29 08:39:17
点击：81 评论：0
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| ①重复性.影响SSCP重复性的主要因素为电泳的电压和温度.这两个条件保持不变， SSCP图谱可保持良好的重复性.一般SSCP图谱是二条单链DNA带，但有时有的DNA片段 可能只呈现一条SSDNA带，或者三条以上，这主要是由于两条单链DNA之间存在相似的 立体构象.有时三条以上的SSCP |
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[核酸技术]
PCR-SSCP技术
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日期：2007-03-29 08:37:02
点击：82 评论：0
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| 随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现。尤其是PCR技术问世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展。如不对称PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性片段长度多态性分析(Restricti |
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[核酸技术]
RT-PCR实验方法总结大全
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日期：2007-02-27 10:19:10
点击：163 评论：0
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| RT- PCR 实验有三步：抽提 RNA ，RT， PCR 。 要求： 1.做RT前必需测 RNA 浓度，逆转录体系对 RNA 量还是有一些要求，常用500ng或1ug。 2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR ，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg |
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[核酸技术]
PCR反应体系与反应条件
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日期：2007-02-15 10:28:57
点击：47 评论：0
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| 标准的PCR反应体系： 10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.1～2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul PCR反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物： 引物是PCR特异 |
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[核酸技术]
PCR技术
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日期：2007-02-15 09:39:05
点击：63 评论：0
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| 实验题目 ：PCR技术 教 师：XXX 实验类型： 基本技术 学 时 ：2(参考) 内 容 ： 一、 仪器设备： PCR 仪 二、 仪器结构： 三、 原 理： 1、PCR技术的基本原理： PCR的最大特点是其扩增产物的特异性、扩增效率的灵敏性、扩增程序的简便性。引物序列及其与模板结合的特异 |
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[核酸技术]
RT-PCR实验步骤
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日期：2007-02-11 10:15:59
点击：290 评论：0
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| 一、组织抽提： 1. 取组织块 50-100 ㎎用液氮在研钵中研磨成粉末 2. 移入玻璃匀浆器加入 1ml Trizol 抽打匀浆 3. 移入 1.5ml 新离心管用 5 ml 针头抽打 4. 冰上孵育 5 分钟 5. 离心 12,000g 4 ℃ 5 分钟 取上清液移入 1.5ml 新离心管 6. 加 0.2 ml 氯仿，震荡，冰上孵 |
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[核酸技术]
RT-PCR实验步骤
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日期：2007-02-11 10:15:59
点击：282 评论：0
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| 一、组织抽提： 1. 取组织块 50-100 ㎎用液氮在研钵中研磨成粉末 2. 移入玻璃匀浆器加入 1ml Trizol 抽打匀浆 3. 移入 1.5ml 新离心管用 5 ml 针头抽打 4. 冰上孵育 5 分钟 5. 离心 12,000g 4 ℃ 5 分钟 取上清液移入 1.5ml 新离心管 6. 加 0.2 ml 氯仿，震荡，冰上孵 |
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[核酸技术]
聚合酶链反应（PCR）技术的发展和应用
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日期：2007-02-11 10:07:02
点击：205 评论：0
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| 聚合酶链反应（PCR）技术的发展和应用 第一节 概述 聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction, PCR），又称无细胞克隆技术(“free bacteria”cloning technique)，是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。该方法一改传统分子克隆技术的模式， |
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[核酸技术]
PCR各处应用模式
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日期：2007-02-11 09:42:29
点击：177 评论：0
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| 一、兼并引物（Degenerate Primer）PCR 密码子具有兼并性，如表22-4，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对兼并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变，但核苷酸的数量应相同。兼并度越低，产物特异 |
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[核酸技术]
影响PCR的主要因素
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日期：2007-02-11 09:39:56
点击：125 评论：0
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| PCR技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品DNA，然后才进行自动热循环，最后进行产物鉴定与分析。引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行，临床应用只需购买PCR检测试剂盒就可开展工作，PCR自动热循环中影响因素很多，对不同的DNA样品，PCR反应中 |
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[核酸技术]
PCR佐剂
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日期：2007-02-11 09:36:46
点击：65 评论：0
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| Various authors recommend DMSO and glycerol to improve amplification efficiency (higher amount of product) and specificity (no unspecific products) of PCR, when used in concentrations varying between 5-10% (v/v). In the multiplex reaction, however, |
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[核酸技术]
定量PCR常见问题解答
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日期：2007-02-10 23:24:58
点击：109 评论：0
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| 1. 定量PCR仪的开关机顺序是怎样的？ 按照正确的开关机顺序操作，有助于延长仪器的使用寿命，减少仪器出故障的频率。开机顺序：先开电脑，待电脑完全启动后再开启定量PCR仪主机，等主机面板上的绿灯亮后即可打开定量PCR的收集软件，进行实验。关机顺序：确认实验已经结 |
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[核酸技术]
PCR技术在苯酶同尿症诊断中的应用
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日期：2007-02-09 09:46:17
点击：72 评论：0
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| 经典型的苯丙酮尿(Phenyketon uria简PKU)是由苯丙氨酸羟化酶(PAH)的遗传性 缺陷引起的一种先天性代谢病，其发病早在我国以为1/10000左右，杂合子频率为 1/50. PKU的临床表现 PKU患儿由于苯丙氨酸羟化酶的缺乏或不是使苯丙氨酸在休丙大量堆识，并经旁 路代谢途径产生一系 |
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[核酸技术]
PCR引物设计的黄金法则
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日期：2007-02-09 09:44:43
点击：261 评论：0
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| 1.引物最好在模板cDNA的保守区内设计。 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如DNAman）比对（Alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度（pri |
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