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[核酸技术]
常见问题分析与对策
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日期：2007-10-26 03:02:38
点击：63 评论：0
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| PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板： |
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[核酸技术]
PCR技术概论
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日期：2007-10-26 03:00:51
点击：71 评论：0
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| PCR技术简史 PCR技术的基本原理 PCR反应体系与反应条件 PCR反应特点 PCR扩增产物的分析 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内 |
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[核酸技术]
PCR技术的发展
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日期：2007-10-26 02:59:16
点击：68 评论：0
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| 聚合酶链反应的历史回顾 聚合酶链反应相关技术的发展 其它体外核酸扩增技术 PCR技术的应用举例 一、聚合酶链反应的历史回顾 1、核酸体外扩增最早的设想 由Khorana及其同事于1971年提出：“经过DNA变 性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重视该过程便可克隆 |
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[核酸技术]
PCR产物的克隆
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日期：2007-10-13 22:02:51
点击：76 评论：0
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| PCR产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。 |
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[核酸技术]
实时荧光定量PCR技术
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日期：2007-10-13 09:33:37
点击：130 评论：0
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| 多聚酶链反应（ polymerase chain reaction,PCR ）技术发明至今已近 20 年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量 PCR （ real-time quantitative PCR ）技术实现了 PCR 从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度 |
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[核酸技术]
聚合酶链式反应（PCR）实验方法
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日期：2007-10-13 09:13:02
点击：190 评论：0
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| 聚合酶链式反应（ PCR ） 聚合酶链式反应（ Polymerase Chain Reaction ， PCR ）是体外酶促合成特异 DNA 片段的一种方法，为最常用的分子生物学技术之一。典型的 PCR 由（ 1 ）高温变性模板；（ 2 ）引物与模板退火；（ 3 ）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过 |
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[核酸技术]
PCR引物设计原则
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日期：2007-10-13 09:10:26
点击：176 评论：0
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| PCR 引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板 DNA 序列。因此，引物的优劣直接关系到 PCR 的特异性与成功与否。 要设计引物首先要找到 DNA 序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构， |
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[核酸技术]
Rt-PCR实验步骤
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日期：2007-07-12 07:54:33
点击：242 评论：0
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| 一、实验器具与材料： 1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl 2、吸头：1ml、200μl、20μl 3、匀浆管：5ml 4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个 5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl 6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖） 1个125ml的白色试 |
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[核酸技术]
附录C 使用一步法RT-PCR从单一细胞中检测基因
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日期：2007-06-13 08:44:28
点击：156 评论：0
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| 方法： 分离单一细胞 在去除了细胞培养基后，COS-7细胞用不含钙镁的DPBS（0.20g/L KCl, 0.20g/L KH2PO4, 8.00g/L NaCl, 2.16g/L Na2HPO4·7H2O）清洗一次。加入Trypsin-EDTA(0.25% tryspsin,1mM EDTA·4Na)到细胞中（3ml/75cm2培养瓶）并保温至最多5分钟。加入20ml生长 |
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[核酸技术]
什么是PCR
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日期：2007-06-13 08:39:16
点击：1394 评论：0
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| 1.什么是PCR Copy to clipboard Posted by: admin Posted on: 2006-09-18 22:48 PCR：聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将 |
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[核酸技术]
rt-pcr检测外周血中肝癌细胞的研究进展
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日期：2007-03-30 10:19:23
点击：112 评论：0
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| 摘要: 应用RT-PCR技术检测外周血中肝癌细胞是近年发展起来的新方法，白蛋白mRNA和AFP mRNA为肝组织特异表达，通过检测这二个转录子作为肝癌细胞存在于外周血的标记，有助于判断肝癌的转移、复发。本文综述了近年有关这方面的研究进展。 肝细胞癌（Hepatocellular carcin |
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[核酸技术]
实时PCR/RT-PCR解决方案
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日期：2007-03-30 10:16:46
点击：174 评论：0
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| 高性能的实时定量PCR和RT-PCR要求高性能的系统。易于使用的qPCR 超级混合物、一步和两步定量RT-PCR系统、以及荧光检测平台，在一个较宽的动态范围内提供更高的灵敏度和特异性，它们利用了最先进的技术，包括： 使用抗体介导热启动技术的Platinum Taq DNA Polymerase,提 |
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[核酸技术]
RT-PCR
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日期：2007-03-30 10:15:28
点击：454 评论：0
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| 聚合酶链反应（PCR） 聚合酶链反应（polymerase chain reaction）技术是一种在体外由引物介导的DNA序列酶促合成反应，可以增加靶基因的拷贝数达百万倍,极大的提高了检测灵敏度，被广泛的应用于分子生物学的各个领域。 ⑴ PCR的基本原理 类似于DNA的天然复制过程，其特 |
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[核酸技术]
PCR-SSCP技术
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日期：2007-03-29 08:48:04
点击：102 评论：0
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| 随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现。尤其是PCR技术问世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展。如不对称PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleavage，RNAase)、限制性片段长度多态性分析(Restricti |
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[核酸技术]
聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP) 实验方法
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日期：2007-03-29 08:44:43
点击：162 评论：0
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| 聚合酶链反应一单链构象多态性分析 (PCR-SSCP) 聚合酶链反应-单链构象多态性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products, PCR-SSCP）是近年来发展起来的一种基因分析方法。 PCR-SSCP分析的基本程序为：首先PCR扩增 |
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