PKUPCR诊断的途径

　　(一)利用PCR-ASO检测，近年来又发展了反向点杂交及非同位标记探针，与PCR-A SO应用起来更为方便，它是检测PKU点突变的最为手段之一.

　　(二)利用等位特异PCR(ASPCR)

　　若将ASP-PCR与多重PCR结合，形成MASP-PCR则一见可检测多个突变位点，要是一 个非常有效的PKU诊断手段.

　　(三)利用PCR-RFLP诊断

　　由于某些突变涉及到酶切位点的变化，因此右PCR-RFLP进行诊断PKU.

PCR在PKU的产前诊断断中的应用

　　由于PKU的治目前沿无有效的方法，因此其产前诊断，防止PKU患儿的出生具有重要的意义，在PKU的产前诊断中，RFLP是较为传统的诊断方法，操作费时，不能及时提供临床诊断信息，而且有相当大的一部分不能提供信息加止还要用同位素标记的探针进行操作，因而大大的限制了其原因，应用PCR技术诊断PKU快速准确，易于满足临 床需要，而是便于推广应用.

(一)，PCR-ASO

　　传统的PCR-ASO及类似的诊断方法尽管准确有效，但操作复杂，往往需要进行多次操作，确诊一测颇为费时，近年来应用的反向点杂交法(reverse dot bolt RDD)，改变了传统的点杂交程序，因而该其检测时程明显缩短，操作也较简化.RDB是将一系列的ASO探针先固定于膜上，然后用扩增的靶DNA与之杂交，在应用时，可将一些较为常见的点突变探针固定于同一膜，而少见的固定于同一膜，因此结束分析样品最多只需杂产两次即可完成PKU的诊断，在这种情况下，即使无证者一亦可进行产前诊断.

(二)MASP.PCR

　　采用MASPPCR亦是进行已知PAU突变点基因产前诊断的简易方法之一.

(三)AmPFLP+PCR-SSCP快速诊断

　　尽管采用PCR-ASO和MASP-PCR可检测全部的常见的PAH基因的已知点突变，但它只能诊断约70～80%的PKU患者及浸入，仍有相当一部分不能同上述方法进行产前诊断，我国董尚志等人利用PAH是国内的STP及VNTR作为多态性标记结合PCR-SSCP进行产前诊断，其诊断的准确率可达90%左右诊方法包括以下几步.

　　1.Amp-FLP连锁分布：等用PAH基因内含子中-STR多态性进行分析，可次66.2%的家之获得有用的诊断信 息，其引物序列为:可扩增片段大小范围为，扩增完毕合用变性胶(尿素)PAG电泳分析 扩增长产物的片段多态性和先证者及携带者对照，确定胎儿的基因组合，以判断是否 为PKU患儿，若用连锁分析不能诊断则进入下步

　　2.外显子4PCR-SSCP

　　3.外显子7，11，12SSCP分析：通过上述3步分析，诊断常可达90%以上，该方法简使快速，准确率多，极适合于 基础应用.若将PCR-ASORDB与Amp-FLP联合应用，则定确率定高，况且要进行杂交，条 件及探治相对复杂，因此尚不够广泛推广于临床检测.