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植物基因表达载体构建
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发布时间：2007-10-24
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植物基因转移的目的在于将目的基因导入需要改良的植物，使之正确而有效地表达，并将产生的目的性状以可预言的方式稳定遗传下去。然而目的基因片段很难直接转入植物细胞，而且由于它自身常无DNA复制所需信息，在细胞分裂时不能复制给子细胞，从而丢失，所以人们要把它连在一些能独立于细胞染色体之外复制的DNA片段上，这些DNA片段就叫载体。常用的载体有质粒和病毒。当然载体还有其它作用，如促进目的基因转化、表达等。 质粒是最常用的载体，它通常是DNA环状分子，可以独立地存在于细菌细胞中。而且质粒上总是有一个或多个可赋予宿主细胞以某些有用特性的基因，如质粒上的抗生素基因可以使宿主细胞在一定浓度的氯霉素或是氨苄青霉素等抗生素存在的培养基中存活。这些抗生素基因在克隆技术中常被用作选择标记（selectable marker）,以选择和鉴定重组子。在基因克隆中使用最广泛而且结构最简单的载体一般都来源于较小的细菌质粒，如大肠杆菌中所存在的这种质粒载体，不仅易于纯化，转化效率高，选择重组子方便，而且可携带的外源目的基因的容量也较大（大至5kb），因此一些常规克隆实验都是用的这些质粒载体。除了在细菌细胞中广泛存在着这种质粒外，在其它细胞中并不普遍，如在真核细胞中仅发现极少的几种质粒，其中研究最深的是酵母（Saccharomyces cerevisiae）中的2um环（2um circle），人们已经将其构建成了能在酵母中表达的载体，使基因工程的应用范围得以扩大。
为构建高效植物表达载体，人们需要对天然质粒及病毒进行一系列改造，如加上耐药性基因片段等，以提高基因转化、筛选、表达的效率。构建好载体后，将目的DNA片段与载体实现连接，形成全新的重组DNA分子，通过一定的方法导入受体植物细胞，便可能获得转基因植株。
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