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实时荧光定量PCR技术
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日期：2007-10-13 09:33:37
点击：130 评论：0
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| 多聚酶链反应（ polymerase chain reaction,PCR ）技术发明至今已近 20 年了，在这期间技术得到了不断的发展，近年来出现的实时荧光定量 PCR （ real-time quantitative PCR ）技术实现了 PCR 从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度 |
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聚合酶链式反应（PCR）实验方法
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日期：2007-10-13 09:13:02
点击：190 评论：0
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| 聚合酶链式反应（ PCR ） 聚合酶链式反应（ Polymerase Chain Reaction ， PCR ）是体外酶促合成特异 DNA 片段的一种方法，为最常用的分子生物学技术之一。典型的 PCR 由（ 1 ）高温变性模板；（ 2 ）引物与模板退火；（ 3 ）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过 |
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PCR引物设计原则
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日期：2007-10-13 09:10:26
点击：176 评论：0
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| PCR 引物设计的目的是为了找到一对合适的核苷酸片段，使其能有效地扩增模板 DNA 序列。因此，引物的优劣直接关系到 PCR 的特异性与成功与否。 要设计引物首先要找到 DNA 序列的保守区。同时应预测将要扩增的片段单链是否形成二级结构。如这个区域单链能形成二级结构， |
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PCR常见问题总汇
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日期：2007-10-02 09:04:15
点击：93 评论：0
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| PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板： |
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PCR污染与对策
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日期：2007-10-02 09:03:12
点击：52 评论：0
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| PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污 染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生. 一、污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于 密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间 |
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增加PCR特异性
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日期：2007-10-02 09:00:44
点击：79 评论：0
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| 增加 PCR 特异性（一） 1.引物设计 细心地进行引物设计是 PCR 中最重要的一步。理想的引物对只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火。设计糟糕的引物可能会同扩增其他的非目的序列。下面的指导描述了一个可以增加特异性的引物所具有的令人满意的特点： (1). 典型 |
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高质量的内切酶 vs. 普通内切酶
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日期：2007-10-02 08:59:49
点击：52 评论：0
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| 不好的内切酶常常被各种蛋白酶、非特异外切酶和核酸外切酶污染。使用被外切酶污染的内切酶切割DNA，则会在切割底物的同时破坏产物的末端（外切酶偷偷切掉1、2个bp，琼脂糖电泳却看不出来），让后续的连接、克隆和表达出现问题！ 而NEB提供的内切酶大部分都经过重组改造 |
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为什么使用蓝冰运输NEB内切酶是安全恰当的？
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日期：2007-10-02 08:58:22
点击：59 评论：0
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| NEB大部分酶类产品都用蓝冰（冰袋）运输。在中国大陆地区，对于较长距离的运输，我们会适当添加部分干冰，以确保酶类产品在整个运输过程中处于较低的温度。 但是，这并不意味着酶的运输必须使用干冰。在近三十年的时间里，我们选择使用蓝冰运输基于以下理由： 所有的酶 |
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酶切常见问题
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日期：2007-10-02 08:57:28
点击：119 评论：0
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| 问题 原因 解决办法 DNA完全没有被内切酶切割 1) 内切酶失活 标准底物检测酶活性 2) DNA不纯，含有SDS，酚，EDTA等内切酶抑制因子 将 DNA过柱纯化，乙醇沉淀DNA 3) 条件不适（试剂、温度） 检查反应系统是否最佳 4) DNA酶切位点上的碱基被甲基化 换用对 DNA甲基化不敏 |
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酶切反应建议
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日期：2007-10-02 08:55:55
点击：82 评论：0
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| 一、 建立一个标准的酶切反应 目前大多数研究者遵循一条规则，即 10 个单位的内切酶可以切割 1 μ g 不同来源和纯度的 DNA 。通常，一个 50 μ l 的反应体系中， 1 μ l 的酶在 1X NEBuffer 终浓度及相应温度条件下反应 1 小时即可降解 1 μ g 已纯化好的 DNA 。如果加 |
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内切酶的特性、酶解和琼脂糖凝胶电泳
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日期：2007-10-02 08:55:03
点击：60 评论：0
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| 学习和掌握限制性内切酶的特性、酶解和琼脂糖凝胶电泳的操作方法，理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具，琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定DNA片段的有效方法。 限制性核酸内切酶： 是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。是体外剪切基因片段的重要工具，所 |
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分子生物学产品常见问题分析
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日期：2007-10-02 08:53:25
点击：57 评论：0
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| 问题 原因 解决办法 DNA完全没有被内切酶切割 1) 内切酶失活 标准底物检测酶活性 2) DNA不纯，含有SDS，酚，EDTA等内切酶抑制因子 将 DNA过柱纯化，乙醇沉淀DNA 3) 条件不适（试剂、温度） 检查反应系统是否最佳 4) DNA酶切位点上的碱基被甲基化 换用对 DNA甲基化不敏 |
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DNA甲基化和肿瘤
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日期：2007-09-18 07:45:41
点击：295 评论：0
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| 表观遗传学的研究表明，基因组CpG二核甘酸中的胞嘧啶，可以通过甲基化转移酶的甲基化作用调控转录和染色质结构修饰，控制寄生性成分转移，维持基因组稳定性和引起X染色体的失活。细胞DNA甲基化模式的维持对于细胞存活、正常胚胎及出生后发育和成人正常生理功能必不可少 |
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454测序法灵敏检测含量稀少突变株
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日期：2007-09-09 22:46:02
点击：99 评论：0
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| 454生命科学公司（454LifeSciences）、罗氏集团和一位耶鲁医学院研究院6月15日宣布，他们利用454公司的基因组测序系统，在一个早期经过临床治疗的样本中鉴定无法检测的稀有抗药性HIV突变。结果公布于巴巴多斯岛举行的第16国际HIV药物耐药会议，证实患者体内携带抗性突 |
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454测序新方法结合Sangon方法完善测序过程
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日期：2007-09-09 22:43:16
点击：227 评论：0
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| 自纽约2月13日的消息，美国能源部联合基因组研究所（DepartmentofEnergy'sJointGenomeInstitute，DOEJGI）的研究人员表示认为在微生物基因组测序方面表现出巨大的潜力的454LifeSciences公司的测序仪（见快速基因组测序时代到来）虽然并不能完全取代传统的Sanger测序方 |
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