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[PCR]
PCR技术（十六）：PCR产物测序
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日期：2006-11-22 16:42:46
点击：178 评论：0
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| PCR技术代替了为测序而反复进行的分子 克隆 和模板制备步骤。PCR技术与自动测序技术相结合后，它将成为一种最快、最有效的测定核苷权序列的方法。本章主要综述各种测模板的制备以及如何完成PCR产物的直接测序。与传统的将PCR片段 克隆 入质粒或病毒 基因组 相比，直接 |
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[PCR]
PCR技术（十五）：个体配子DNA序列的PCR分析
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日期：2006-11-22 16:41:40
点击：130 评论：0
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| 高等生物遗传图谱的构建依赖于选择性杂交后代的分析或者通过家系分析法来计算连锁关系。对人类而言仅后者是可行的。使用长度多态性限制片段（RFLPS）在构建人连锁图谱方面已取得长足的进步。为了对带有与已知表现型相关的RFLP标记的基因进行定位，首先得建立间隔约10CM |
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[PCR]
PCR技术（十四）：反向PCR
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日期：2006-11-22 16:40:08
点击：132 评论：0
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| 描述一种大聚合酶链反应(PCR)应用的方法，使在已知序列的核心区边侧的未知DNA成几何级数扩增。用适当的限制性内切裂解含核心区的DNA，以产生适合于PCR扩增大小的片段，然后片段的末端再连接形成环状分子。PCR的引物同源于环上核心区的末端序列，但其方向性，使链的延长 |
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[PCR]
PCR技术（十三）：PCR用于进化分析
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日期：2006-11-22 16:36:32
点击：135 评论：0
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| 进化遗传学具有两个并列的研究方向：系统发育的重建和种群分析。自1962年，Zuckerkandl和Pauling提出蛋白质序列和基因序列的比较可以象分子种一样用于标志现存物种分化的时间以来，各种生化方法被用于系统发育的研究。在最初二十年内，同功酶的电泳分析、免疫学比较和 |
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[PCR]
PCR技术（十二）：PCR-SSCP的发展现状
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日期：2006-11-22 16:35:21
点击：95 评论：0
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| 随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonucleasecleavage，RNAase)、限制性片段长度多态性分析(Restriction |
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[PCR]
PCR技术（十一）：PCR片段拼接的SOE和SDL方法
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日期：2006-11-22 16:33:50
点击：81 评论：0
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| PCR技术（多聚酶链式反应）是现代分子生物学的一个巨大突破，它能在体外迅速、大量、灵敏地扩增基因片段。可是，经PCR技术扩增的大量相关基因片段如何能有效拼接，却是一个很值行探讨的问题。传统的方法是引入限制性内切酶位点，这不但操作繁杂，而有时为了构建限性位 |
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[PCR]
PCR技术（十）：PCR产物克隆方法
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日期：2006-11-22 16:32:26
点击：134 评论：0
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| 平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的 |
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[PCR]
PCR技术（九）：PCR扩增产物的电泳分析
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日期：2006-11-22 16:29:53
点击：166 评论：0
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| 凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种. 一、琼脂糖凝胶电泳: 琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物.根据琼脂糖的溶解温度，把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖.低熔点琼脂糖熔点为 |
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[PCR]
PCR技术（八）：扩增较大片段DNA的PCR方法
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日期：2006-11-22 16:28:07
点击：81 评论：0
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| 一般PCR方法在扩增大片段DNA时的局限性： 通常所用的PCR方法都在两个方面有局限，即目标产物精确程度和合成片段的大校Pfu(Pyrococcusfuriosus)DNA聚合酶，具有完整的3'外切酶校读活性（3'-editing-exonuclease），可以将每个循环中碱基的错配率由10*-4降到10*-3，从而 |
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[PCR]
PCR技术（七）：mRNA差异PCR技术
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日期：2006-11-22 16:26:43
点击：88 评论：0
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| 生物界的丰富多彩很大程度上取决于严格调控下的基因的选择性表达。高等生物的细胞内约含有 105 个不同的基因，而主基因在某个特定的细胞中，只有占 15 ％的一小部分表达。而且在不同的细胞中，选择性表达的基础也是不同的。正是这些基因的选择不同决定了整个生命的过程 |
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[PCR]
PCR技术（六）：PCR技术应用进展
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日期：2006-11-22 16:22:59
点击：131 评论：0
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| PCR技术自1985年建立以来，发展之迅速、应用之广泛，表明其具有强大的生命力.近些年来，基于PCR的基本原理，许多学者充分发挥创造性思维，对PCR技术进行研究和改进，使PCR技术得到了进上步地完善，并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术 原位PCR就是在组织细 |
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[PCR]
PCR-聚合酶链反应的进展
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日期：2006-11-22 16:15:03
点击：304 评论：0
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| 在聚合酶链反应(PCR)的方法建立以前，面院DNA长链上某种基因的变化有很大难度。1983年由KryMullis等利用当时已经发现的DNA聚合酶，首先建立的体外DNA序列扩增法，基本方法是用寡核苷酸引物扩增位于两个已知序列之间的DNA序片段。反应在DNA聚合酶催化下完成。引物的序列 |
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[PCR]
PCR技术（六）：PCR技术应用进展
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日期：2006-11-22 16:12:28
点击：193 评论：0
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| PCR技术自1985年建立以来，发展之迅速、应用之广泛，表明其具有强大的生命力.近些年来，基于PCR的基本原理，许多学者充分发挥创造性思维，对PCR技术进行研究和改进，使PCR技术得到了进上步地完善，并在此基础上派生出了许多新的用途. 原位PCR技术 原位PCR就是在组织细 |
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[PCR]
PCR技术（五）：常见问题分析与对策
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日期：2006-11-22 16:11:22
点击：170 评论：0
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| PCR产物的电泳检测时间 一般为 48h 以内，有些最好于当日电泳检测，大于 48h 后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR 反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④ PCR 循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 |
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[PCR]
PCR技术（四）：PCR污染与对策
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日期：2006-11-22 16:10:29
点击：134 评论：0
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| PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生. 一、污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交 |
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