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[PCR] 推荐:PCR产物的直接测序
  日期:2006-11-22 19:23:24 点击:412 评论:0
凝胶纯化PCR扩增的靶序列 如果最佳PCR反应条件不能产生所需的特异性产物,可采用新的寡核苷酸重新进行扩增,或用凝胶电泳来分离不同的PCR产物,而后再各自重新扩增进行序列分析。长度不同的片段可以用琼脂糖凝胶电泳来分离: 1.片段大小在80-100bp时,可采用3%NuSieve1%
[PCR] 单个细胞的PCR分析
  日期:2006-11-22 19:21:27 点击:270 评论:0
单个二倍体细胞 在分析单精子以前,Li等人对个体二倍体细胞内的β珠蛋白基因进行过研究。两个组织培养细胞株用于这些实验。其中一个纯合是镰刀型细胞密码子6(βS)发生突变,另一个纯合子则来源于正常的βB等位基因。扩增含有密码子6的β珠蛋白片段的引物,及能够区别
[PCR] 聚合酶链反应[PCR]
  日期:2006-11-22 19:19:10 点击:551 评论:0
[ 实验原理 ] 聚合酶链式反应( polymerasechainreaction )即 PCR 技术是美国 Cetus 公司人类遗传研究所的科学家 K.B.Mullis 于 1983 年发明的一种体外扩增特定基因或 DNA 序列的方法。 PCR 具有很高的特异性、灵敏度,在分子生物学、基因工程研究、某些疾病的诊断以
[PCR] PCR技术在苯酶同尿症诊断中的应用
  日期:2006-11-22 19:16:59 点击:227 评论:0
经典型的苯丙酮尿(Phenyketonuria简PKU)是由苯丙氨酸羟化酶(PAH)的遗传性缺陷引起的一种先天性代谢病,其发病早在我国以为1/10000左右,杂合子频率为1/50. PKU的临床表现 PKU患儿由于苯丙氨酸羟化酶的缺乏或不是使苯丙氨酸在休丙大量堆识,并经旁路代谢途径产生一系列
[PCR] PCR反应体系
  日期:2006-11-22 19:15:30 点击:693 评论:0
1.缓冲液 标准的缓冲液含10mMTris·HCl,pH为8.3-9.0(室温),而在延伸温度(72℃)下,pH值接近7.2。缓冲液中含有一种二价阳离子,用于激活DNA聚合酶的活性中心,一般使用Mg2+,有时使用Mn2+。一般以MgCl2的形式提供,标准浓度为1.5mM。Mg2+浓度的高低会影响扩增的
[PCR] PCR反应程序
  日期:2006-11-22 19:15:06 点击:246 评论:0
1.常规程序 将PCR反应所需的成分配置完后,在PCR仪上于94-96℃预加热几十秒至几分钟,使模板DNA充分变性,然后进入扩增循环。在每一个循环中,先于94℃保持30秒钟使模板变性,然后将温度降到复性温度(一般50-60℃之间),一般保持30秒钟,使引物与模板充分退火;在72
[PCR] RT-PCR在检测HCV中的应用
  日期:2006-11-22 19:13:35 点击:249 评论:0
丙型肝炎病毒 (HCV) 是引起输血后非甲非乙型肝炎 (NANBH) 主要病原体,是一种全球性传染,给人类健康带来极大的危害 . 据统计,丙型肝炎患者中约 60% 转为慢性肝炎,其中又有 20% 的病人转为肝硬化或肝细胞癌 . 而目前在预防和治疗 HCV 感染上还没有有效的方法 . 因此
[PCR] PCR引物设计的原则与要点
  日期:2006-11-22 17:38:26 点击:327 评论:0
[PCR] 推荐:PCR实验技术指南
  日期:2006-11-22 17:34:10 点击:1965 评论:0
PCR的问题,无疑是绝大多数学生物的人都关心的问题。今天我们把相关内容整理出来,与大家共同讨论,希望对大家能有所帮助。 一、引物设计 所谓“工欲善其事,必先利其器”,这年头手工设计引物的人似乎不多,还是用软件方便些,防止你一不小心看走眼,丢一个碱基,同时
[PCR] 免疫PCR [Immuno PCR, Im-PCR]
  日期:2006-11-22 17:31:46 点击:242 评论:0
一、定义; 免疫PCR是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。 用抗体检测抗原是免疫学的最基本方法,用酶或同位素标记抗体可使检测的敏感性提高,常用的定量检测方法ELISA和RIA均基于标记分子可以使检测的信号增强。免疫PCR
[PCR] PCR在突变基因检测中的应用
  日期:2006-11-22 17:25:36 点击:346 评论:0
分子生物学在医学领域中的应用越来越广泛,基因突变在肿瘤和遗传病的发生过程中的作用也日益受到重视,因此检测与遗传病及恶性肿瘤发生有关的突变基因(mutantgene)也成为了分子生物学,医学遗传学以及肿瘤学研究中的热点。 基因突变((genemutation)是癌基因激活,抗癌
[PCR] 传统mRNA差异显示技术与第二代差异显示系统
  日期:2006-11-22 17:20:42 点击:183 评论:0
真核生物中,从个体的生长、发育、衰老、死亡,到组织的分化、凋亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答,本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30000个不同的基因,但在生物体内任意细胞中只有10%的基因得以表达,而这些基因的表达是按事件和空间顺序有序地进
[PCR] 随机引物PCR技术
  日期:2006-11-22 16:46:20 点击:273 评论:0
一. 实验原理 聚合酶链式反应( Polymerasechainreaction )简称 PCR ,它是一种 DNA 体外扩增技术。 1985 年美国的 Mullis 等人发明了 PCR 技术,在体外利用模板 DNA 、特定的寡聚核苷酸引物和 DNA 聚合酶,通过 DNA 变性、复性和延伸过程合成一条互补的 DNA 链。反
[PCR] 聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆
  日期:2006-11-22 16:45:15 点击:231 评论:0
第一节概述 PCR(PolymeraseChainReaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤:(1)变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链;(2)退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;(3)延伸(Exte
[PCR] PCR技术(十七):用PCR扩增cDNA库中的特异序列
  日期:2006-11-22 16:44:28 点击:85 评论:0
最常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库,然后用抗体或DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地 克隆 了大量基因,但建立和筛选CDNA库是一项非常耗时.费力的工作,而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选需大量蛋白质序列结构的资料。聚合酶链的反应(P
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