1、 RNA提取缓冲液（CTAB）：2% CTAB（W/V），2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100 mM Tris-HCl（pH8.0,DEPC处理的水配置），25mM EDTA, 0.5g/L 亚精胺Spermidine，2.0M NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC 处理的水配制即可。

2、 SSTE：1 M NaCl，0.5% SDS（W/V），10 mM Tris-HCl pH8.0，1.0 mM EDTA  10M LiCl 直接用蒸馏水配10M LiCl，加1‰的DEPC过夜后，高温灭菌。; B9 Q# q& ~0 l* ^0 i

3、 3M NaAc

4、 氯仿:异戊醇（24:1）

5、 酚（pH4.5）:氯仿:异戊醇（25:24:1）3 G2 w# O+ e% Q. S( \: A

6、 DEPC处理水 用1‰的DEPC处理蒸馏水过夜，高温灭菌% X9 M! g! c1 @+ u, l

7、 无水乙醇" b* ]' m* ]. J- K

8、 70%酒精

试验步骤：

1、 实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热，离心管中加入ME（巯基乙醇）（10mL加80ul，50mL中加入300ul）。

2、 取约0.8g菌丝体（液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了），在液氮中迅速磨成精细粉末，装入50 mL离心管，按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液，颠倒混匀。

3、 65℃水浴3-10 min，期间混匀2-3次。

4、 加入等体积的酚（注意是酸酚pH4.5）:氯仿:异戊醇（25:24:1）抽提（10,000 rpm，4℃，5 min）。  j9 U7 j% F. a* l

5、 取上清，等体积的氯仿:异戊醇（24:1）抽提（10,000 rpm，4℃，5 min）. `( F( y6 n2 A; K; n5 s" W) m

6. 加入1/4V体积10M LiCl溶液，4℃放置6hr以上(或过夜)。

6、 10,000 rpm，4℃离心20 min。

7、 弃上清，用500 ulSSTE溶解沉淀。4 X; [- b/ \1 [" e0 S% n

8、 酚:氯仿:异戊醇（25:24:1）抽提两次, 氯仿:异戊醇（24:1）抽提1次（10,000 rpm，4℃，5 min）。

9、 加2V体积的无水乙醇，在-70℃冰箱沉淀30 min以上。& l$ Q- p+ x4 c9 m

10、 12,000 rpm，4℃离心20 min。

11、 弃上清。沉淀用70%酒精漂洗一次，干燥。7 ]' W# y  U& Z% d; Y4 ^6 x

12、 加200 ul的DEPC处理水溶解。