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高质量的内切酶 vs. 普通内切酶
文章来源: 文章作者: 发布时间:2007-10-02   字体: [ ]  
 
不好的内切酶常常被各种蛋白酶、非特异外切酶和核酸外切酶污染。使用被外切酶污染的内切酶切割DNA,则会在切割底物的同时破坏产物的末端(外切酶偷偷切掉1、2个bp,琼脂糖电泳却看不出来),让后续的连接、克隆和表达出现问题!
    而NEB提供的内切酶大部分都经过重组改造,在最大程度上避免了外切酶污染的问题,让你的基因安全可靠!

好的内切酶

不好的内切酶

· 活性高
· 品质稳定,保存期长
· 无其它核酸酶污染(包括外切酶污染)

·活性不高
·保存一段时间后活性迅速下降
·有其它核酸酶的污染(包括外切酶污染)


质粒DNA

 酶切反应 

好的内切酶切割

   不好的内切酶切割

 

完整的DNA片段



      

连接

   完整的DNA片段

           少量的外切酶损坏DNA末端
  

           不完整的DNA片段+12dNTP

      

连接

 

成功连接,克隆并表达

连接失败,克隆不成功,无法表达或产物不正确

NEB EcoRV: Survival rate=49/50

Company T EcoRV: Survival rate=3/50


看看,不同质量的内切酶,实验结果大不相同!



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