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酵母RNA的提取及含量测定(地衣酚显色法)
文章来源: 文章作者: 发布时间:2007-01-16   字体: [ ]  
 
实验题目酵母RNA的提取及含量测定(地衣酚显色法)
   师:XXX
实验类型:综合
学  时:8(参考)
内  容
一、实验目的 
(1)熟悉酵母RNA的提取方法
(2)掌握地衣酚显色法测定酵母RNA含量的原理和方法
二、实验原理 
RNA与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变成糠醛,后者与3, 5-二羟甲苯反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁和氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20-250微克范围内,光吸收与RNA浓度 成正比。地衣酚反应特异性较差,凡是戊糖均有此反应。RNA和其他杂质也能给出类似的颜色。
三、试剂与器材
分析天平、恒温水浴、分光光度计、沸水浴等。0.2%氢氧化钠、乙酸、95%乙醇、乙醚、地衣酚试剂
四、操作方法
① 酵母RNA的提取
② RNA地衣酚法显色测定
③ 数据处理及计算。
五、关键步骤与注意事项
该法反应特异性较差,凡是戊糖均有此反应。因此,测RNA含量时可先测定DNA的含量,再计算出RNA的含量
六、思考题
1、稀碱法提取的原理是什么?有什么优缺点?
2、提取RNA过程中为什么要严格控制时间、温度、pH值?
3、用学过的知识分析3种催化剂:FeCl3·6H2O,CuCl2·H2O和CuO,那种催化剂的催化效果更好?
4、地衣酚反应中,干扰RNA测定的因素有哪些?如何能够减少它们的影响?


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