前言
血小板活化试验，对于血小板功能、心血管疾病的研究，有重要意义。使用流式细胞仪进行多参数分析，可以特异、灵敏地检测血小板表面标记，了解血小板的活化状态和反应性，并同时获得更多关于血小板的信息。在疾病监测、血小板疾病患者的筛选、预测并发症等方面有良好的应用前景。
使用推荐的三色流式分析方法检测血小板活化的优点是：
检测血小板的反应性。
了解血小板活化进程。血小板先发生膜糖蛋白变化，然后是胞浆内颗粒释放到血小板外。
同时检测多种血小板表面标志。
高度灵敏。
直接检测血小板的多种标志。
使用全血，标本量少。
操作简便快捷，将血小板人工激活减至最低。
BDIS血小板活化试剂组成为：
PAC-1 FITC：血小板活化早期的标志物，即活化的 gpⅡb/Ⅲa复合物，抗体与活化后血小板膜表面的gpⅡb/Ⅲa复合物纤维蛋白原结合位点相结合。BDIS抗体为IgM型，建议使用PAC-1结合阻断剂RGDS做阴性对照。
CD62P PE：血小板活化后期的标志物，特异地与活化血小板结合。静止血小板胞浆内a颗粒含有CD62P，血小板活化时，颗粒内糖蛋白向膜外释放，血小板表面表达CD62P。
CD61 PerCP：特异的泛血小板表面标记，既与活化血小板结合，也与静止的血小板结合。CD61与CD41联合，即为血小板表面gpⅡb/Ⅲa复合物。在本试验中，用FL3设阈值。
试验用品
采血管：枸橼酸钠抗凝的真空采血管。
一次性12×75 mm Falcon试管。
微量加样器和加样头。
BD抗体：2-8℃保存。
| 荧光抗体 |
FITC |
PE |
PerCP |
| 对照管 |
PAC-1+RGDS |
IgG1 |
CD61 |
| 试验管 |
PAC-1 |
CD62P |
CD61 |
RGDS (PAC-1阻断剂)：用PBS配制，10mg/ml。
血小板激活剂：ADP，浓度2×10－4M，2-8℃保存。也可选用其他激活剂，如PMA、纤维蛋白、TRAP。
PBS缓冲液：含0.1%NaN3，过滤后2-8℃保存。
固定液：含1%多聚甲醛的PBS缓冲液，2-8℃可保存一周。
振荡混匀器。
FACS流式细胞仪：进行数据获取。
CaliBRITE Beads/FACSComp软件：FACS仪器校正，预设获取条件。
CellQuest软件：试验数据获取和分析软件。
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