|
当前位置：主页>细胞技术> 正文
|
|
|
细胞培养注意事项
|
|
文章来源：
文章作者：
发布时间：2006-11-22
字体：
[大
中
小]
|
|
|
做好准备工作。不要急于投身到细胞培养中去，要先设定计划：步骤，工具，试剂。特别是将细胞用于大规模生产时，尤其如此。eg.经过干热灭菌的容器一般认为可以在一周内保持无菌状态，如果准备多了，用不完的就得重新灭菌，耗费能源、占用灭菌空间，不值得；干热灭菌需要一天的时间，当器皿准备不足时，只能干着急，错过了最佳操作时间，也许得很久才能将细胞状态再调整好。
对于骄气的细胞，我一般都是第一天处理完后，加少量培基（够盖住瓶底部），第二天换液，以免死细胞和碎片对活的产生不良影响。
新配的培养基直接用很清亮，但是在－20度保存一段时间后再溶解就要出现很多杂质，用37度水孵育没有效果，握在手里不停摇动非常有效。其实对于操作熟练的人来说，污染并不是我们想像那样容易出现，园子里很多人都问否污问题，而培养基的PH值往往被忽略，而且大多数人都习惯于一次配制1升培养基，分装成 10X100ml，用1瓶，另外9瓶放在－20度保存，很容易出现结晶，镜下看就是一些杆状的物资，有时候晃动培养基，肉眼就可以看到很多沉淀，这就需要我们在用之前好好摇匀了。
操作中的安全 ：
a.我犯的一个巨经典的错误至今难忘，刚做时酒精擦手，擦镊子，湿淋淋的就拿镊子过火，结果火顺着镊子着到手上，虽然不怎么热，可是手上的汗毛都被烧了。这个错误以后再也没犯。
b.过完火的试管口一定不能摸，时刻记着只拿试管的下1/2。
c.给酒精灯加酒精永远记住不要拿酒精灯口那个灯心管，否则终身难忘。
d.当酒精灯出现什么意外时一定要镇静，先让他着一会可能没事，不要慌乱中打坏别的东东。
e. 离心机尤其高转速时，配平当然要牢记，可是一定要检查一下离心机里还有没有其他东东（有一次我离东西，着急，放进去刚离一会我就觉得声音不对，打开一看里面竟然有一根别人没有拿出来的小管子）。还有一次配完平就打开离心机盖准备离心，结果吓个半死，原来别人正在离心，幸好管子没飞出来
细胞冻存：当细胞状态好，或者代数比较早，一定要大量冻存，不要吝惜暂时的大批使用血清，当细胞状态不好，长不起来的时候，马上取出来复苏，省时省力，不要去尝试努力恢复状态不好的细胞，费时间也费血清，会令你痛苦不堪。另外冻存的细胞不要放到一个地方，－80度，液氮（甚至不同的液氮罐）都放一点，谁也不敢保证不出意外，冰箱也可能有化的时候（我们－20度冰箱就化过），都放在一块容易全军覆没。
按照试剂的保存标准保存，象血清、胰酶等没开封的-20℃，开封后-4℃保存一般不超过7天（用完它吧，不然浪费了）
5、一定要弄清楚每个组分的作用，特点，比如NaHCO3容易分解，因此培养基在过滤除菌时pH会上升，一般是0.1-0.3，所以在过滤之前，要把培养基的pH调低0.1-0.3。如果你不了解NaHCO3容易分解的特点，就不会做相应的处理，那么培养基不符和要求，细胞就长不好
台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况，用0.4%台盼蓝直接染色5-10分钟，在显微镜下观察即可，活细胞不被染色。方便易用，因此在实验室中比较常用，尤其在心肌细胞原代培养中。
上一篇：细胞培养技术在肿瘤方面的研究 下一篇：细胞化学染色分类技术
共3页: 上一页 [1] [2] 3 下一页
|
|
|
↑返回顶部
打印本页
关闭窗口↓
|
|
|
|
|
|
 |
推荐文章 |
|
|
|
