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植物组织培养知识概要
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日期：2007-03-03 10:01:07
点击：406 评论：0
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| ★ 植物组织培养（Plant Tissue Culture）： 是指通过无菌操作分离植物体的一部分（外植体explant），接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。（主要有原生质体（Protoplast），悬浮细胞，组织（愈 |
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基因定位的方法
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日期：2007-03-01 10:29:26
点击：226 评论：0
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| 1．体细胞杂交法 体细胞是生物体除生殖细胞外的所有细胞。将从身体分离的体细胞做组织培养进行遗传学研究的学科称为体细胞遗传学（somatic genetics）。体外培养细胞可人为控制或改变环境条件，并可建立细胞株，长期保存，进行各种正常和病理研究。与基因定位有关的是体 |
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siRNA的转染
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日期：2007-03-01 10:02:54
点击：101 评论：0
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| 将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质 |
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RNAi的应用方向
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日期：2007-02-28 11:27:21
点击：115 评论：0
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| 1.高通量的研究基因功能 在后基因组时代，需要大规模高通量的研究基因的功能，由于 RNAi能高效特异的阻断基因的表达，因而RNAi成为研究基因功能的很好的工具。研究者将线虫三号染色体上2232个基因对应的dsRNA合成出来，并注射到线虫性腺内，然后观察子代细胞分裂时出现 |
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RNAi相关术语
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日期：2007-02-28 11:25:55
点击：107 评论：0
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| 1.RNAi：（RNA interference）RNA干扰 一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNA interference，RNAi，也译作RNA干预或者干涉）。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。 2.siRNA |
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体内表达shRNA（短发夹RNA）的设计
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日期：2007-02-28 11:24:32
点击：129 评论：0
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| 1.克隆到 shRNA 表达载体中的 shRNA 包括两个短反向重复序列，中间由一茎环（ loop）序列分隔的，组成发夹结构，由pol Ⅲ启动子控制。 随后在连上 5-6 个 T 作为 RNA 聚合酶 Ⅲ 的转录终止子。 2.两个互补的寡核苷酸两端须带有 限制性酶切位点 。 3.Stratagene 发现 29 |
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RNAi的应用
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日期：2007-02-28 11:21:21
点击：75 评论：0
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| 1. 研究基因功能的新工具 已有研究表明RNAi能够在哺乳动物中灭活或降低特异性基因的表达，制作多种表型，而且抑制基因表达的时间可以随意控制在发育的任何阶段，产生类似基因敲除的效应。线虫和果蝇的全部基因组序列已测试完毕，发现大量未知功能的新基因，RNAi将大大 |
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siRNA表达载体
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日期：2007-02-28 11:19:58
点击：97 评论：0
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| 多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子(pol III)中的一种，操纵一段45—50nt的发夹结构RNA（small hairpin RNA, shRNA）在哺乳动物细胞中的表达,shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。这一类启动子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6启 |
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siRNA制备方法比较
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日期：2007-02-28 11:17:26
点击：75 评论：0
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| 比较项目 化学合成 体外转录 RNase III 降解 dsRNA siRNA 表达载体 PCR 表达框 材料需求 21-mer RNA oligos( 一对 ) 29-mer DNA oligos( 一对 ) 转录模版 (200-1000bp ，两侧带 T7 启动子 ) 55-60-mer DNA oligos( 一对 ) ~50-mer DNA oligos( 一对 ) 全部制备 / 合成 |
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siRNA的制备
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日期：2007-02-28 11:16:13
点击：65 评论：0
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| 体外制备 1.化学合成 许多国外公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学 |
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siRNA的转染
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日期：2007-02-28 11:14:24
点击：72 评论：0
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| 将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀 将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质 |
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植物组织培养知识概要
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日期：2007-02-27 11:30:27
点击：97 评论：0
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| ★ 植物组织培养（Plant Tissue Culture）： 是指通过无菌操作分离植物体的一部分（外植体explant），接种到培养基上，在人工控制的条件下（包括营养、激素、温度、光照、湿度）进行培养，使其产生完整植株的过程。（主要有原生质体（Protoplast），悬浮细胞，组织（愈 |
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甲醇酵母表达系统
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日期：2007-02-26 10:08:56
点击：144 评论：0
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| 甲醇酵母基因表达系统是一种最近发展迅速的外源蛋白质生产系统。甲醇酵母是可利用甲醇作为唯一碳源的酵母，主要有 H.Polymorpha、Candida Bodinii、Pichia Pastoris 三种，其中 Pichia Pastoris 作为基因表达系统使用得最多、最广泛 ［1］ 。与以往的基因表达系统相比 |
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Pichia酵母表达系统使用心得
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日期：2007-02-26 09:41:00
点击：280 评论：0
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| 甲醇酵母表达系统有不少优点，其中以Invitrogen公司的Pichia酵母表达系统最为人熟知，并广泛应用于外源蛋白的表达。虽然说酵母表达操作简单表达量高，但是在实际操作中，并不是每个外源基因都能顺利得到高表达的。不少人在操作中会遇到这样那样的问题，生物通编者特地收 |
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Pichia酵母表达直接PCR鉴定重组子的方法
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日期：2007-02-26 09:37:04
点击：139 评论：0
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| 模板的处理： 1.平板上的菌落长到肉眼可见时（约12小时）； 2.将除了模板之外的其它PCR反应液的组分准备好，并分装。引物最好使用Kit中已有的检测专用的引物，或者一条使用载体上的引物，一条使用基因的特异性引物（这样做可以鉴定非定向 克隆 的方向）； 3.用半根灭菌 |
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