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地高辛标记cRNA探针
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日期：2006-11-23 16:53:44
点击：139 评论：0
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| 1．组织前处理在组织制片中以冷冻切片（厚10～30μm）最佳。切片贴在预先清洁，高温处理并涂以粘附剂载玻片上，先在37℃预干燥4h，然后置于37℃烤箱中过夜。经过上述处理的切片如在-20℃可保存2～3周，在-70℃可保存数月之久，有报告可保存数年之久的。但仍以新鲜制片 |
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酰化试剂（Bolton和Hunter试剂）法
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日期：2006-11-23 16:53:27
点击：133 评论：0
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| 1．原理用酰化剂3--（4-羟苯基）丙酸—N琥珀酰胺酯（Bolton—Hunter试剂）做连接试剂，将 125 I标记在羟苯基的2，5位置上，再将琥珀酰胺酯水解，通过一个酰氨键将3--（4—羟基—5— 125 I—苯基）接在蛋白或多肽的末端氨基上。 2．方法 125 I—Bolton—Hunter试剂可用 |
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光敏生物素核酸探针原位杂交组化程序
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日期：2006-11-23 16:53:02
点击：123 评论：0
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| （1）石蜡切片脱蜡入水后，置0.1mol/lPBSpH7.2冲洗5min；冰冻切片直接入PBS冲洗5min。 （2）0.1mol/l甘氨酸PBS冲洗5min。 （3）0.4%TritionX-100PBS冲洗15min。 （4）蛋白酶K1μg/ml（0.1mol/lTris–HClpH8.0,50mmol/LEDTA配）37℃保温30min。 （5）4%多聚甲醛PBS固定5 |
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表皮细胞培养
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日期：2006-11-23 16:51:10
点击：122 评论：0
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| 1．取材：取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮肤更好，切成0.5～1平方厘米小块。 2．EDTA处理：先置入0.02％EDTA中室温置5分钟。 3．冷消化：换入0.25％胰蛋白酶中，置4℃过夜。 4．分离：取出皮肤，用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。 5． |
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PCR实用技巧(引物设计等）
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日期：2006-11-23 16:50:05
点击：815 评论：0
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| 增加PCR的特异性： 1.primersdesign这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些条件 a.足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量 b.GC%40%~~~~60% c.5端和中间序列要 |
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结构分类数据库介绍
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日期：2006-11-23 16:49:51
点击：215 评论：0
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| 除了基因组数据库和序列数据库外，生物大分子三维空间结构数据库则是另一类重要的分子生物信息数据库。根据分子生物学中心法则，DNA序列是遗传信息的携带者，而蛋白质分子则是主要的生物大分子功能单元。蛋白质分子的各种功能，是通过不同的三维空间结构实现的。因此， |
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功能基因筛选的基本策略
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日期：2006-11-23 16:49:08
点击：186 评论：0
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| 功能基因筛选研究的基本策略包括:(1)通过表达谱差异分析、生物信息学分析和基因克隆等途径获得候选基因;(2)对候选基因进行功能评价(identificationoffunction,可在基因组、转录、蛋白质组和代谢产物等水平进行);(3)基因功能确证(validationoffunction);(4)决定开发战略 |
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原位聚合酶链式反应（in situ PCR）和原位反转录聚合酶链式
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日期：2006-11-23 16:36:09
点击：119 评论：0
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| （一）、仪器设备 英国ThermoHybaid原位PCR仪。 （二）、操作流程 1 、原位PCR步骤 1）预处理： （1）切片常规脱蜡； （2）0.2mol/LHCl处理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min； （4）Nase消化组织37℃30min； （5）梯度酒精脱水，室温干燥。 2）原位扩增： |
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内切酶的特性、酶解和琼脂糖凝胶电泳
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日期：2006-11-23 16:35:39
点击：177 评论：0
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| 学习和掌握限制性内切酶的特性、酶解和琼脂糖凝胶电泳的操作方法，理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具，琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定DNA片段的有效方法。 限制性核酸内切酶： 是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。是体外剪切基因片段的重要工具，所 |
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蛋白质提取与纯化技术简介
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日期：2006-11-23 16:35:18
点击：113 评论：0
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| 选择材料及预处理 以蛋白质和结构与功能为基础，从分子水平上认识生命现象，已经成为现代生物学发展的主要方向，研究蛋白质，首先要得到高度纯化并具有生物活性的目的物质。蛋白质的制备工作涉及物理、化学和生物等各方面知识，但基本原理不外乎两方面。一是得用混合物 |
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原位杂交操作规程
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日期：2006-11-23 16:35:02
点击：73 评论：0
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| （一）、仪器设备 医用微波炉； 水浴锅。 （二）、试剂 0.2mol/LHCl ： HCl8.2ml ， H20 定容 0.5L 。 0.1mol/L 三乙醇胺 (pH8.0): 三乙醇胺 5.33ml ， H20 定容 0.4L 。 .5ml/L 醋酸 -2.5ml/L 醋酸酐 : 三乙醇胺 13.2ml ， NaCl5g ，浓 HCl4ml ， H20 定容 0.98L ，醋 |
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蛋白芯片的基本原理及技术研究现状
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日期：2006-11-23 16:34:39
点击：122 评论：0
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| 随着分子生物学芯片技术研究工作的进一步深入开展，NDA芯片技术已经被逐渐应用于对生物样品中的各种已知或未知的核酸序列表达的检测和比较研究。但是，作为生物体细胞中实施化学反应功能成分的蛋白质，其相当部分与活性基因所表达的mRNA之间未能显示出直接的关系，因此 |
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液相色谱法简介
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日期：2006-11-23 16:34:09
点击：168 评论：0
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| 气相色谱 不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。当无纯物质对照时，定性鉴定就很困难，这时需借助质谱、红外和化学法等配合。另外大多数金属盐类和热稳定性差的物质还不能分析。此缺点可高效液相色谱法来克服。在经典液相色谱的基础上， |
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限制性内切酶质量控制
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日期：2006-11-23 16:33:51
点击：139 评论：0
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| 单位定义 限制性内切酶的一个活性单位是指，在50μl的反应体系里，采用随酶提供的NEBuffer，用1个小时的时间，彻底消化1μg底物DNA所需要的酶量。酶切反应应在带盖的Eppendorf管中进行，选用技术数据卡上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前，浓缩的酶应该用推荐的贮存 |
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石蜡DNA提取
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日期：2006-11-23 16:32:41
点击：109 评论：0
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| 1.取蜡块切片15-20张（8UM），置于EP管中，加入1ML的二甲苯，37度作用3小时，10000×3分钟，倾去二甲苯。重复3-4次，观察管壁是否光滑。若有蜡质残存，需继续脱蜡。 2.剃度酒精水化：100%1ML，室温30分钟，10000×3分钟，去上清；95%；75%；50%。 3.消化：1×SSC500UL |
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