1.         8 mg 辣根过氧化物酶放入1 ml玻璃瓶，加入1 ml双蒸水溶解，液体呈棕色。

2.         放入一个磁力搅拌子，电磁搅拌同时逐滴缓缓加入新配制的 NaIO4 0.2 ml，室温下继续搅拌40 min，液体呈现草绿色。

3.         将全部溶液用滴管装入反复用去离子水冲洗的透析袋中，4 oC 对1  mM pH 4.4的NaAc透析过夜，中间换液3－4次，每次300 ml，溶液最终呈浅棕色。

4.         按照酶：抗体＝1：1的比例准备抗体，抗体浓度不小于2 mg/ml。

5.         对0.01 M Na2CO3透析过夜，中间换液3－4次。

6.         将透析好的HRP溶液（浅棕色）装入玻璃瓶，加入0.2 M Na2CO3溶液将pH调整至9.0， 混匀后立即加入透析好的抗体，边加边用电磁搅拌器搅拌。

7.         用0.2 M Na2CO3溶液将HRP/抗体混合物的pH调整至9.0（9-10之间就可以），室温继续搅拌3hr。

8.         加入新配制的硼氢化钠溶液100 ul，4 oC放置2 hr。

9.         4 oC，1×PBS中充分透析，每2hr换液一次，共换4 次。